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逆流色譜的原理和發(fā)展

更新時間:2022-09-16      點(diǎn)擊次數(shù):1784

 逆流色譜的原理和發(fā)展

  逆流色譜的原理和發(fā)展

  原文:F.Edward Chou

  The Principles and Development of Countercurrent Chromatography

  逆流色譜的原理和發(fā)展

  任何熟悉液液萃取(使用分液漏斗)和色譜(例如HPLC)技術(shù)的人都很容易理解逆流色譜液液萃取的原理(countercurrent chromatography(CCC))。

  液液萃取為化學(xué)家們分離大量的化學(xué)物質(zhì)提供了一個簡單的方法,而且使用的溶劑最少。把樣品溶在兩相溶劑系統(tǒng)中,振搖使兩相充分混合,靜置后,兩相重新分層。這些步驟是分離樣品組分的關(guān)鍵。

  這種經(jīng)典的液液萃取在色譜工作者看來,最大的缺點(diǎn)是它在分離過程中只有一個理論塔板數(shù)。(事實(shí)上,這種情況下沒什么理論可言。這一個分離塔板數(shù)是源自于工業(yè)上的分餾。

  因此,化學(xué)工作者要么設(shè)計一合適的單步分離方法去適應(yīng)自己的需要,要么就用多次液液萃取去提高分離度。

  通常使用前者,因為后者太麻煩了。(盡管多次液液萃取經(jīng)常用到,但溶劑系統(tǒng)在不同的提取中通常要改變,以便提高效率。)

  改善分液漏斗的嘗試

  為了改善分液漏斗,以經(jīng)過許多的嘗試。克雷格逆流分布儀是其中一個最引人注意的突破。

  這套精妙的儀器,把一系列的分液漏斗有效的排成鏈,重復(fù)的進(jìn)行系列的步驟:

  振搖(混合)、靜置、分離,在重頭開始,這樣就提高了塔板數(shù)。假如有足夠的塔板數(shù),那這套儀器可以達(dá)到色譜級的分離。

  液滴逆流色譜(DCCC)

  在發(fā)展過程中又開發(fā)出了液滴逆流色譜(Droplet CounterCurrent Chromatograph)。這個儀器把一系列垂直的管子用毛細(xì)管連接起來。液體固定相留有直管中,把流動相慢慢的泵進(jìn)去,(如果流動相比較重就從上方泵進(jìn)去;反之,則從下方)。象所有的色譜那樣,組分比較容易溶于流動相中的就移動的快;而比較容易溶于固定相中就滯后了。于是就分離開來了。很顯然,每一個直管只有最小可能的理論塔板數(shù)。所以,要有顯著的效能就要用大量這樣的直管。其分離步驟如下:把樣品液滴與流動相混合,通過不移動的固定相,期間沒有發(fā)生振搖。液滴的大小與其他溶劑系統(tǒng)的參數(shù)限制了溶質(zhì)在兩質(zhì)中的分配。靜置最終在直管末端形成,在這兒,流過固定相的流動相在通過毛細(xì)管進(jìn)入下一根直管前先聚集起來。如果流速過高就會干擾靜置并破壞了分離。通過毛細(xì)管,流動相從一個直管流入下一個直管,達(dá)到分離的目的。DCCC最大的弱點(diǎn)是可允許的流速太低,因此分離時間長,兩相混合差,相對來說,造成效率就低了。

  離心液滴逆流色譜(centrifugal DCCC,centrifugal planetary chromatograph,CPC)

  比 DCCC進(jìn)步的地方就是使用離心加快重力分離。離心液滴逆流色譜更通用的叫法是離心行星色譜,使用很小的直管和毛細(xì)管(用多性塑料制成多層的)。一套實(shí)用的儀器包含數(shù)以千計的直管,可以獲得幾百個理論塔板數(shù)的效能。CPC的缺點(diǎn)和DCCC相似,只是用離心代替了地球重力分離。另外,CPC還多了個缺點(diǎn),就是它在流動相的進(jìn)口和出口必須使用旋轉(zhuǎn)流體密封件;而這些密封件性能不好,價格又高,容易損耗,并且限制了泵液的壓力,進(jìn)而限制了流速和離心速度。

  高速逆流色譜(High-Speed Countercurrent Chromatography,HSCCC)

  現(xiàn)代的CCC源于Dr.Yoichiro Itod(國家健康研究中心)的研究:行星離心分離機(jī),及其能支持的許多可能的柱幾何學(xué)。這些巧妙的儀器運(yùn)用了鮮為人知的離心分離機(jī)定子與轉(zhuǎn)子非旋轉(zhuǎn)連接的方法。(這超出了當(dāng)前的討論范圍,涉及到如何達(dá)到這一目的的方法,任何一本討論CCC的書對此都有詳細(xì)的闡述)。功能上,高速逆流色譜有能自轉(zhuǎn)和公轉(zhuǎn)的螺旋盤繞的惰性管(既進(jìn)行繞自軸旋轉(zhuǎn)的行星式旋轉(zhuǎn),又同時進(jìn)行繞公軸旋轉(zhuǎn)。)組成。自軸和公軸(像行星自軸和恒星的公軸)必須同步,這里的討論只集中于不同HSCCC的共同的地方。這兩種旋轉(zhuǎn)造成螺旋盤繞管中作令人昏亂的運(yùn)動的液體產(chǎn)生混合區(qū)和靜置分層區(qū)。這就為色譜形成造就了非常好的分離環(huán)境。

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