食物中的維生素含量介于納克到毫克之間，因此美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）強(qiáng)制要求對(duì)例如嬰兒配方奶粉等基質(zhì)中的維生素含量進(jìn)行標(biāo)記。維生素的化學(xué)多樣性使得我們難以對(duì)所有維生素同時(shí)進(jìn)行萃取和分析。為此，水溶性和脂溶性維生素的分析通常分開進(jìn)行，這就延長(zhǎng)了分析時(shí)間。現(xiàn)在，我們要介紹一種降低維生素分析時(shí)間和成本的方法。

在我們的研究中，先采用了一種高靈敏度、可靠且用時(shí)大約 15 分鐘的方法，該方法采用紫外檢測(cè)技術(shù)了同時(shí)測(cè)定 9 種脂溶性維生素。在分離和定量操作中，我們采用的是配置安捷倫 Poroshell EC-C18 色譜柱的安捷倫 1260 Infinity 液相色譜系統(tǒng)。

隨后將論證如何將這種耗時(shí)的方法有效地轉(zhuǎn)換為一種省時(shí)（3.5 分鐘）的采用安捷倫 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)的超液相色譜（UHPLC）方法。當(dāng)我們迫切需要超快速分析時(shí)，這種大幅縮短時(shí)間的方法其益處顯而易見。

圖 1.采用 15 cm 安捷倫 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱對(duì) 9 種脂溶性維生素進(jìn)行 HPLC 分離。放大的內(nèi)插圖顯示了三種不同形式的維生素 A 的分離 （放大 圖片）

安捷倫 1260 Infinity 液相色譜系統(tǒng)可提供準(zhǔn)確的分析結(jié)果

我們采用安捷倫化學(xué)工作站 B.04.02 軟件控制的安捷倫 1260 Infinity 四元泵液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行本次研究。圖 1 展示了安捷倫 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱（150 mm×3.0 mm，2.7 µm 粒度）在 13 分鐘內(nèi)對(duì) 9 種脂溶性維生素進(jìn)行了分離。

由于分子結(jié)構(gòu)的多樣性，因此zui大吸光度會(huì)因維生素的不同而不同。我們使用安捷倫化學(xué)工作站軟件的峰純度分析功能來檢查各個(gè)峰的純度并對(duì)方法的特異性作出評(píng)價(jià)。為了驗(yàn)證該方法，我們對(duì)精度、線性范圍、準(zhǔn)確度、特異性、回收率和可靠性進(jìn)行了研究。有關(guān)液相色譜系統(tǒng)和成功驗(yàn)證結(jié)果的詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱安捷倫應(yīng)用報(bào)告 5990-8668EN.

營(yíng)養(yǎng)成分的標(biāo)記：分析證明了方法的適用性

為了說明該方法能夠有效用于營(yíng)養(yǎng)成分的標(biāo)記，我們對(duì)嬰兒配方奶粉和復(fù)合維生素片中的維生素 D 進(jìn)行定量分析，然后將所得結(jié)果與標(biāo)示值進(jìn)行比較。我們利用校準(zhǔn)曲線的方程進(jìn)行計(jì)算。采用回收率校正方法，計(jì)算得到的嬰兒配方奶粉和復(fù)合維生素片中維生素 D 的含量分別為 6.0 µg/100 g 和 12.0 µg/片，這些數(shù)值與標(biāo)示值非常接近。結(jié)果表明該方法非常適用于定量食品樣品中的維生素。

圖 2. 快速分析：采用 UHPLC 方法在安捷倫 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)上對(duì) 9 種脂溶性維生素進(jìn)行分離 （放大 圖片）

采用 UHPLC 方法進(jìn)行分析只需短短三分鐘

接著，我們開發(fā)了一種采用二極管陣列進(jìn)行檢測(cè)的 UHPLC 方法，能夠有效分離 9 種脂溶性維生素（見圖 2）。此方法采用了由安捷倫化學(xué)工作站 B.04.02 軟件控制的安捷倫 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)。有關(guān)系統(tǒng)和結(jié)果的詳細(xì)信息，請(qǐng)參閱安捷倫應(yīng)用摘要 5990-8668EN。與之前使用的 15 分鐘 HPLC 梯度方法相比，這種新的 UHPLC 方法可節(jié)約 66% 的分析時(shí)間和溶劑。

總的來說，使用這種 UHPLC 方法可獲得*的色譜分離度。雖然視黃醇和視黃酸會(huì)發(fā)生共洗脫，但這對(duì)維生素的分析不會(huì)造成問題，因?yàn)樵诮o定的樣品基質(zhì)中，維生素 A 同時(shí)以醇（視黃醇）和酸（視黃酸）的形式存在的幾率很低。

峰面積和保留時(shí)間重現(xiàn)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值較低，這證實(shí)了所開發(fā)的 UHPLC 方法的可靠性和靈敏度。使用此方法能夠?qū)κ称窐悠愤M(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分標(biāo)記快速分析。