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了解下液相色譜儀的使用

更新時(shí)間：2016-10-24      點(diǎn)擊次數(shù)：1986
液相色譜儀的使用
1．色譜柱它包括空柱和填料?？罩莾?nèi)壁拋光的不銹鋼管，內(nèi)徑為4～5mm，長(zhǎng)100～250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈，用勻漿法填充固定相。將此柱裝入儀器的管路中，用柱式機(jī)械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相。等基線平直后可用苯、萘、菲的混合試液，用正己烷（含0.05%甲醇）或甲醇：水（83：17）為流動(dòng)相測(cè)定柱效及分離度塔板數(shù)在2～3萬(wàn)/ml以上及分離度在1.5以上者，柱效好。為防止柱污染，常用1個(gè)50mm長(zhǎng)，4~5mm內(nèi)徑，裝有硅膠（40-50mm）或立柱相同填料的保護(hù)柱（預(yù)柱）接在主柱之前，以延長(zhǎng)色譜柱的壽命。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng)，以洗去鹽類、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生。
2．流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中，經(jīng)過(guò)有濾過(guò)頭、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱，zui后自檢測(cè)器流出或收集或作廢液回收。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法（isocratic dlution），即自洗脫開始到結(jié)束，溶劑的配比恒定。另一類為梯度洗脫法（gradicnt clution）,即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過(guò)程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過(guò)程中很好分離，而整個(gè)色譜過(guò)程縮短。必須注意，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測(cè)的反相液相色譜法中。
3．檢測(cè)器適用于血藥濃度的檢測(cè)器有紫外線吸收，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種。紫外檢測(cè)器應(yīng)用于對(duì)紫外光有吸收的藥物，大多數(shù)藥物分子對(duì)紫外光有吸收，故能較普遍采用，檢測(cè)限有0.1μg左右。紫外檢測(cè)器有固定波長(zhǎng)型、可變波長(zhǎng)型及掃描器，既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測(cè)，又能提高測(cè)定靈敏度，重現(xiàn)性較好。熒光發(fā)射檢測(cè)器對(duì)能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。80年代應(yīng)用激光替代氙燈光源，光強(qiáng)度增加了3~4倍，對(duì)某些藥物的檢測(cè)限可達(dá)pg級(jí)。電化學(xué)檢測(cè)器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測(cè)兒茶酚胺類及有酚類基團(tuán)的各種藥物和代謝物。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流，放大后檢測(cè)，檢測(cè)限pg級(jí)。
4．?dāng)?shù)據(jù)處理現(xiàn)代液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，除記錄譜外，還能自動(dòng)記錄峰的保留時(shí)間，能自動(dòng)積分求算峰面積，并能按照預(yù)定的程序作有關(guān)計(jì)算，報(bào)告分析結(jié)果。
在液相色譜使用過(guò)程中故障排出時(shí)要遵守以下原則：一次只改變一個(gè)因素，從而確定假定因素與問(wèn)題之間的；如果通過(guò)更換組件來(lái)排查故障時(shí)要注意將拆下的完好組件裝回原位，從而避免浪費(fèi)；養(yǎng)成良好的記錄習(xí)慣，一個(gè)良好的記錄是成功地進(jìn)行故障排除的關(guān)鍵。
總之，在使用液相色譜時(shí)一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)，儀器系統(tǒng)的干凈是用好儀器和維護(hù)維修儀器的關(guān)鍵。

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